飞龙掌血化学身分的钻研pdf

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  西北农林科技大学 硕士学位论文 飞龙掌血化学成分的研究 姓名:楚冬海 申请学位级别:硕士 专业:动物学 指点教师:高锦明;许又凯 20080501 飞龙掌血化学成分的研究 摘要 飞龙掌血(而拙加甜细打础)为芸喷鼻科飞龙掌血属动物,别名筋钩、见血飞、大救驾、 三百棒等,分布予亚溯、非洲及等地,木质藤本,具有散瘀止血,祛风除湿,消肿 解毒等功能,根皮可用于医治跌打毁伤,风澎性关节炎,肋闻神经痛,胃痛等多种痛症; 叶可外用,治痈瘴胂毒,毒蛇咬伤等。为了进一步认识其疗效的物质根本及合理的操纵 该动物资本,我们研究了它的化学成分。 本篇论文阐述了飞龙掌血(乃妣玩船拯艇翻(Lillll。)La擞,)根及根皮中的化学成分,特 别是喷鼻豆素类和生物碱类化学成分的研究,以动物化学和现代化学分手理论为根本,利 U王.20 用多种层析材料和分手手艺(包罗常压硅胶柱层析、制备薄层层析、Sephadex 及RP.18等),从该动物的根及根皮部门的乙醇提取物平分离判定了9个化合物,波谱 阐发确定它们次要为喷鼻豆素类和生物碱类化合物,别离为:小叶九里喷鼻内酯(ml】rraXocm, 初次从该动物平分离获得。此外,该动物中尚含有少量的黄酮和甾体等化合物。 环节词:飞龙掌血;化学成分;喷鼻豆素;生物碱 STUDIESoNTHECHEMICAL CONSTITUENTSoF勋幽勉砌撂s玩f把握 ABSTRACT /毖aeommonused跏ition越C量1从neso beenusedforthe memcme,芏b露妇;渤搿溆西c口has a珏d 瓤破me砖of嚣融强纛圭从e溺Ⅸy,内煳鑫耄ism,楚r鑫ll黻通so鳇.稻科e越绣e搬a圭撕a董basis take触tlse 9 of也is始sQ雌羚e,鑫sys从em撼cp氧y埝c量赠b纛ea薹i=蝌es垃g毪鲢。珏w弱锄敷ke矗,磁d we糟0btained。m anda珏d玲ids曲缸妇ed舶难this compounds preViouss,coum翻ns of were ofbioactiVe chemicalconstitllents genusreponed.hlsearching compoullds,也e 勋砒玩黜肠玎c口wcre inVestigated。 皿lismssertacionelaboratedthe andidentific撕onof廿1echeI】缸cal ex仃action,is01ation cons缸tllents五的m硒融勉黜妞矗伽(“Illl.)Lam. 9 were co】1潮n isol敷蔚蠡的m me髓10dof eompo戚s 勋融勉嚣施ff徽by也e a硼Rp—lS 如∞搬粕豁即hyWi氇silie岛A12侥,S印h勰eX∑H一20901.强e∞氆po髓蠡wefc identi基ed by蹭ectrala觳alySis跚S,j Theirs觚ctllresw㈤elucidated 1~3w.ereobt咖edfhomthis fOrtlle Toddalosill(8),6一M劬y“tidine(9).Comp01lIlds plallt ljrsttiIne. 1(EY WoRDS:乃d如妇甜妇ff嬲,chemicalconsti觚nts,co嫩碰n,an(aloi硅s 缩略词 41 缩略词 d二沉峰 S核磁共振化学位移 DMS0二甲基亚砜 J耦合 衍离子 砒质荷比 掰S四甲基硅烷 瓜红外光谱 斟紫外光谱 NMR核磁共振 p浦越ne吡啶 鳓B·MSFastatombo麒lb龇hnent m嬲s印ec饥lIIl快速原子轰击电离质谱 EI.MSElec们n ioniza垃onma8s impact Spec饥m电子轰击质谱 ESI-MS 电喷雾质谱 DC聊S解吸化学电离质谱 翼)F—MS秘糙e of碰g融羰猫s警e蝴飞翔时闽质谱 k缎最大接收波长 蛰一最高接收频次 heteronuclear HSQC coherence异核单量子相关 single-quantlll:Il 礤艘}Ch烈eronuclear剃1tiple.bond∞黜lalion异多核键相关 研究生学位论文的独创性声明 本人声明:所呈交的学历硕士学位论文是我小我正在导师指点下进行的研究工做 及取得的研究成果;论文申的研究数据及成果是按学校《关于规范西北农林科技大学研 究生学术的暂行》获得的,若是违反此,一切后果取法令义务均由本人承 担。 尽我所知,除了文中出格加以标注和称谢的处所外,论文中不包含其他人曾经颁发 或撰写过的研究成果,也不包含其他人和本人本人已获得西北农林科技大学或其它教育 机构的学位或证书而利用过的材料。取我一同工做的同志对本研究所做的任何贡献均已 正在论文的称谢中做了明白的说唠并暗示了谢意。 研究生签名: 磐譬海 时间:z一口矛年岁月2多日 导师指点研究生学位论文的许诺 本人许诺:我的学历硕士研究生蕉芏3新呈交的学历硕士学位论文是正在我指点 下开展研究工做及取得的研究成果,属于我现岗职务工做的成果,并严酷按照 学校《关于规范西北农林科技大学研究生学术鲰暂行》而获得的研究成果。 若是违反学校《关于规范西北农林科技大学研究生学术的暂行》,我必需接 受按学校相关的惩罚处置并承担响应导师连带义务,. e 导师叛高钎吧 时阕:捌罗年,月≥罗曩 关于其他单元取人员对研究生学位论文利用授权的申明 任何收存和保管本论文各类版本的单元和小我未经本论文做者的导师授权,不 得有对本论文进行复制,点窜、刊行、出租、改编等著做权的行为,不然,按 《中华人平易近冒著做权法》相关处置并逃查法令义务。 经本论文做者的导魉同意,授权西j匕农林葶誓技大学可向从管上级相关单元送交 论文的纸质件和电子文档,答应论文被查阅和借阅,能够采用复印、缩印或扫描等 复制手段保留、汇编学位论文;不然,按《中华人平易近国著做权法》相关规 定处置并逃查鎏律义务。 研究生签名:蹩譬三辱 时间:加。7年 岁月 z弓日 导师签名:专萄讫昂盯乙时间:匆。萝年, 月z多日 第~章文献综述 第一章文献综述 1.1当前国表里对动物化学的研究概况 檀物药鳏中药,是我囡保守防治疾瘸的主要兵器,它为中华平易近族的繁殖生患徽出了 不成磨灭的贡献,即便正在高度文明的今天,中药正在各类疾病的防止和医治中仍然具有举 脚轻沉的地位。跟着人类文明的前进,人类的栖身和都发生了很大变化,疾病 谱系也随之发生了变化,诸如神经和微轮回系统疾病、恶性肿瘤、艾滋病、老年性痴呆 等各类现代疾病对入类健康的越来越严沉。人们曾经认识到谣药不良反映较强,对 有些疾病西药也为力,这人们从包罗中药正在内的其它天然产品中寻找无效药 源。中药是包罗汉族和其它平易近族正在内的全国各平易近族的保守药,其绝大部门是草药,也就 是动物药瑟l。 跟着现代中药学的成长和新药开辟的要求,人类火急需要领会认识中药的无效成 分,中药的无效成分一般是指具有明白的化学布局式和物性的化学物质。若是无效 成分的浓度不蹇,就需要加大服用剂量,圊时因为无效或者效用低的部门的存正在会使中 药容易吸潮变质,难以保留,因而,有需要对中药的无效成分进行提取分手。 当前很多国度曾经对中药的化学成分进行了大量的切磋,日本对多量中药的化学成 分进行了比力深切的研究,他们对人参、葛根、芍药、柴胡、桔梗、酸枣仁、附子等中 药进行了研究,从这些药物平分离出的葛根素、柴胡皂营、桔梗皂苷等药效成分戮。基 本和前苏联还从人参中提取出多种无效成分,次要是人参皂苷【3】。前苏联以及东欧国度 很注沉对动物药的研究,以研究强壮药,出格是人参、红景天、五味子等为其特点,发 现这些药物能提高机体的免疫能力和顺应链力,其研究曾经赢用于活动医学和航天 医学【4】。印度动物药的使用汗青也很长久,近二十年来印度对药用动物的化学成分研究 成长很快,曾经成功的分手到数百种新化合物,测定了它们的复杂布局,并对此中一部 分化合物进行7药理活性筛选15l。 我国的很多科学工做者也对中药的无效成分的提取、分手、布局判定、药理感化等 方面做了良多工做,如从陈皮中获得的川陈皮素及橙皮甙具有平喘感化【q;从兴安杜鹃 平分离获得的杜鹃素具有祛痰感化等∽。可是我们正在这方面的工做还处于相对掉队阶 段,很多中药的无效成分并不清晰,很多项墨有待于进行更深一步的研究。 1.2飞龙掌血属的生物学特征取资本分布 以《中国高档动物恣》收载为准,芸喷鼻科约160属1700余种,全世界分布,次要产 于热带及耍热带匿。中国约有28属l∞种,包罗引进栽培种,南北各地均有,次要产 于西南及南部,以柑桔类果树最为出名,山麻黄属和枳属为中国特有属。本科动物多为 芳喷鼻性常绿乔木或灌木,常具刺,少为草本,除经济价值较高,做为绿化和抚玩树种之 2 飞龙掌盘化学成分的研究 井,该科多种动物的根、叶、果实等部位也具有较好的药用价值嘲。 飞龙掌血(勋妣触盘s泐f∞(Linn。)L锄.)为荟喷鼻科飞龙掌血属的独一动物,别名筋 钩、见血飞、大救驾、三百棒等,木质藤本,枝干均密被倒钩刺,老茎有厚木栓层,褐 色;长技淡绿色或黄绿色,具自色皮孔f9l。时互生,具柄,三出复时;小时无柄或近无 柄,叶片呈卵形、倒卵形,长圆形至倒披针形,长3~6厘米,宽1.5~2.5厘米,先 端急尖或微尖,基部楔形,边缘具细圆锯齿或皱纹,革质,两面,有模糊豹腺点。 花秋末冬初最盛,白色或淡,单性;苞片极藐小:萼片4~5枚,基部合生,卵形, 长不及1厘米,边缘被短茸毛;花瓣4~5枚,初时外面被短的微柔毛;雄花常成腋生 的伞房状圆锥花序,雄蕊4~5枚,较花瓣长:雌花常成聚伞状圆锥花序,花较少,不 育雄蕊4~5,子房被毛。果橙至色,有深色腺点,果皮肉质,概况有3~5条 微凸起的肋纹。种子肾形,黑色。花期10~12胄。果期12月至翌年2月【l镯。 生于山坡、旁、灌丛中或疏林中。次要分布于湖南、湖北、陕西、福建、、 浙江、四川、云南、贵娜,广西等地。非洲东部和亚渊东南部及南部及等地均有分 布【l】o 具有散瘀止血,祛风除湿,消肿解毒等功能,根皮可用于医治跌打毁伤,风湿性关 节炎,肋闻神经痛,霪痛等多种痛症;铃用治骨折,豁伤出盘;叶可外用,治痈痃瓣毒, 毒蛇咬伤n¨。此外报道其具有抗A型流感病毒活性【12】等。 1.3飞龙掌血属的化学成分研究 飞龙掌血属只要飞龙掌血1种动物,文献记录飞龙掌盘的根及根皮含有喷鼻豆素类、 生物碱和挥发油成分【13,141,此外还含甾醇和树脂等成分∞1;根皮中也含有喷鼻豆素类和生 物碱类化合物,另终还含有甙类及三藉类化合物嗣。 1.3.1喷鼻豆素类化合物 酸喷鼻豆素,2)黔蚓,其喷鼻气,根基布局如下: 2 喷鼻豆素类取糖连系而成的苷叫喷鼻豆素苷(coumaIinglyCosides)。喷鼻豆素以逛离形态及 其营类存正在于生物体内。 喷鼻豆素是一种用处极广的主要的喷鼻料,到现正在为止已发觉的喷鼻豆素及其衍生物有 800多种【17l羽。因其具有必然的喷鼻气,正在无机合成及天然界中均拥有主要,可正在化妆 品、饮料、食物、喷鼻烟橡胶成品及塑料制晶中做为增喷鼻剂【18】,因其同时具有抗微生物【19·201 第一章文献综述 3 等主要的生物活性,因此正在农业、工业、医药行业均表示出主要感化,正在制药行业中常被 用做两头体和药物。 1.3.1.1简单喷鼻豆素类(cou腿rins) l 提取物平分离获得一个新的喷鼻豆素类化合物为8.(3.羟基.3.甲基.2.丁烯基).5,7.二甲氧基 飞龙掌血的根部门经甲醇回流提取,酸碱中和萃取后,其氯仿部门通过频频硅胶柱 色谱、制备薄层色谱及Ⅷ,LC等分手手段进行分手,获得12个简单喷鼻豆素【拶胛t68】,别离 (8-(3,3一Dimemylallyl)·6,7一dime廿10xycoumarin,l5)隅331。 S魏鑫腿a等【34】入对飞龙掌盎的根皮部门进一步的分手,又褥到2个篱单喷鼻豆素类化 O O Me 5 4 3 H0 0HC MeO 8 4 飞龙掌舷化学成分的研究 0 MeO O {O 9 O 潮e 0Ⅺe O Me Me Me OMe {3 {毒 Meo O Meo Me0 MeO ·18 17 15 1.3.1.2呋喃喷鼻豆素类(furocou越rins) 据文献畅】报道,日本学者瑚嫩从茧喷鼻科动物飞龙掌盘根的霉醇提取物中还分手褥 到一个呋喃喷鼻豆素类化合物为异茴芹喷鼻豆素(isopinlpinellin,18)【75】。 l。3.1.3双喷鼻豆素类(biscou腿rins) 沉992年,珏磕等入【3嗣从飞龙掌盘根的乙醇提取物平分离获得一个新的双番豆素类 化合物为飞龙掌血喷鼻豆醌(toddaco吼auquinone,19)f761。 Sh锄a等人【361自飞龙掌血的根皮平分离获得一个双喷鼻豆素类型化合物为飞龙掌血双 喷鼻豆素(£o熊as速,20)刚。 1993年,Is撕i等人【37】对飞龙掌血根的乙醇提取物进一步的分手,又获得一个新的双喷鼻 豆素类化合物为飞龙掌血新双喷鼻豆素(toddalosin,21)【781。 第一章文献综述 5 0酗e H3C e OMe 18 19 Me0 OMe Z0 21 1.3.2生物碱类化合物 , 生物碱(a墩砖oi蠡)是一类存正在于生物界(次要是动物中,大多具显著生物活性的 含氮碱性化合物。氮凡是正在环中。中含有碳、氢、氧和氮四种元素,少少不含氧原 二;【38】 J 卑 生物碱是生药中一类主要的活性成分,目前已分手到lOOOO余种i”lis】,此中80余 用于平喘阑,萝芙本中的利血平∞e翠㈣用于降压蹦,喜树中的喜树碱 【421(c糊mtomecme)取花中的新碱【431(vincristine)用于抗肿瘤等。 王.3.2。王苯并菲啶类生物碱囝e建zo王[e]曲on8廷乞h从di建etype) 1997年,Chou等…人从飞龙掌血根的提取物平分离获得3个苯并菲啶类生物碱分 24)叫。 I蛳i等【151人从飞龙掌血根及根皮的甲醇提取物中进一步分手获得8个苯并菲啶类生 物碱,按照理化性质和波谱阐发确定了化合物的布局,别离为:去一N一甲基囱屈菜红碱 6 飞龙掌血化学成分的研究 Tan等【45】人从飞龙掌血根的乙醇提取物平分离缛到一个苯并菲啶类生物碱为光时花 椒碱(mtidine,33)嗍。 Shanna等f461从飞龙掌血根部位提取分手获得8一羟基二氢自屈菜红碱 (8.Hydroxydilly如chelerytb血e,34)戮】。 e COeH3 酗 O鹾e 0醚e 0黼e 22 23 24 0 酗e0 OMe OMe 25 O Q\\o 尸\o 第一章文献综述 7 01. o//o MeO OMe 32 31 0Me 34 1.3.2.2喹啉类生物碱(quinolinetype) Is城等M人从飞龙掌血平分离获得一个新的喹啉类生物碱,经波谱阐发和理化性质 确定了化合物的布局,定名为飞龙掌血喷鼻豆喹啉酮(toddacoumalone,35)瞰】。 C南u等湖入对飞龙掌血根的提取物平分离获得一个喹啉类生物碱为N一甲基芸喷鼻碱 (N—methylflindersine,36)郾l。 I鼬i等瞰l入从飞龙掌血根及根皮的甲醇提取物中进一步分手获得3个喹啉类生物 芋碱(sk妇mi撕ne,38)【951,全缘喹诺酮(inte鲥quillolone,39)【961。 l Me 36 0酗e 35 8 飞龙攀血化学成分的研究 OMe H0 MeO Me 38 :褥 1.3.2.3生物碱类化合物 2005年,Ja缸等【48】人从飞龙掌血根的甲醇提取物平分离获得2个薪的生物碱别离为: Tsai等【491人从飞龙掌血根的提取物平分离获得2个新的生物碱类化合物别离为:飞 N,N’.dicyclohexylurea(45)‘1021。 1998年,Tasi等f50】人对飞龙掌血根的提取物进一步分手,褥到2个生物碱类化合物, 初次从飞龙掌血中发觉。 Ch蝴等【5l】人从飞龙掌血根的提取物平分离获得一个新的生物碱,判定定名为塔坦 奎宁细蠢d蠲毽i∞基珏e,毒8)‘1朗。 Sh撇a等人别离从飞龙掌血根的提取物平分离获得2个化合物为:飞龙掌血默碱 (toddali(1he血le,49)删和阿尔洛花椒酰胺(锄ottianamide,50)删。 H3co H3cO C瓣3 CH3 41 40 o 0 e\ N H c\N H 42 43 第一章文献综述 9 NH2 O酗e 46 Ho 蜗 48 OMe OMe 49 SO 啼 H3C0 l H3cO C瓣3 eH3 289 205 Or H H3co H3c0 H3CO 渊3 CH3 218 177 图1.1.化舍物40的质量 of 40 Kg。l—lMass&鄹翎l撕onco“攀。雌d 10 飞龙掌血化学成分的研究 1.3.3萜类化合物 黄平等嘲入从飞龙掌盘茎的乙酵提取物平分离获得4个新三蕤酸别离为:2瑾,3毡, 19a-trihydroxyll一oxo.1Jrs-12一ell一28一oicacid(51),2a,3a,11伐, 19a-te妇hydroxy_u嚣一12一睨一28一oic 13(18)一diene-28一oic acid (54)。别的还获得2个已知的三萜酸类化合物为:野鸭春酸(55)和撕ullicacid(56)。 为4myd∞x弘l—methylpyrr01idine一2-carboxylicacid(S7)。 00H 明日纯 00H HO,,. 鲫It 辆扩’ 器畏二oH52R—OH R=H SS OH H HO H HO 1.3.4其他类伐合物 J抽等【48】人从飞龙掌血根的甲醇提取物中初次发觉分手获得3个甾醇类化合物别离 60)。 稳ai等人对飞龙掌曲根的提取物进一步的分手获得2个新的化合物别离为: Toddanin(61)‘50】和Tbddasiatin(62)‘4射。 第一章文献综述 警H,删 一… H H oHOH 60 57 61 {。4飞龙掌血的药理活性蚕开究 飞龙掌血除含有较大量的喷鼻豆素类化合物外,还含有生物碱,这些成分均被为 阐扬药效的活性成分【541。 l。4.1喷鼻豆素类化合物的生物活性 1.4.1.1抗肿瘤活性 从飞龙掌血的根及根皮平分离获得的喷鼻豆素二聚体对癌症的化学疗法常有用 的成分f5卯。 M麟蜥A等也提出,喷鼻豆素衍生物Aurap te粥(删对啮齿类动物的皮肤、舌、 食道和结肠癌有疗效,是一种有前途的、布局新、疗效好的抗癌药物。并指出AUR对于 惹起白细胞生物化学响应是一种无效的试剂,其感化机制以取癌症发生相关的发炎 为根本f娴。 1.4.1.2升压感化 SH勉SP鼠审(熏毽∥l∞g体沉)可惹起血压逐渐舟高。 1.4.1.3抗凝血感化 Chen等【581人通过尝试发觉 聚活性。 12 飞龙掌血化学成分的研究 1.4.1.4其他感化 il溅痉挛的活性【锄。 用瑾a帮猫觳e攮od检测发觉番豆素类纯合物有癸淑e嚣群g 综上所述,喷鼻豆素类化合物具有多方面较着的生物学活性,特别正在抵当当今风险人 类健康的AIDS和肿瘤方面,寻找无效的天然药物,并对其活性成分进行深切研究, 更显得尤为主要。 l。4.2生物碱类化合物的生物活性 1.4.2.1抗炎镇痛感化 郝小燕等【删人操纵二甲苯、琼脂致肿及羧甲基纤维素钠致小鼠腹腔白细胞逛走,不雅 察飞龙掌血的抗炎感化;采用扭体法,察看飞龙掌血的镇痛感化;察看血清丙氨酸氨基 nsfe rallsfe rtateaminot 转移酶(alalline姗inotrase,√蝴)、天门冬氨酸氨基转移酶(aSpa 为飞龙掌血生物总碱制剂小鼠灌胃给药能二甲苯所致耳肿缩和琼脂所致脚肿缩,抑 制羧警基纤维素钠所致腹腔自细胞逛走,醛酸所致小鼠扭体反映。给药2周后, 用,较长时间给药对肝净无毁伤感化。 l。4。2.2扩血管感化 感化无快速耐受性,且不被H1及H2组胺受体、M胆碱受体及p肾上腺素受体之阻断荆取 管滑润肌组织对钙的摄取,这能够通过测定组织中未被镧置换的低亲和力同位素45Ca的 含量来确定。F0圭(0。06至4毽酬)可显著降低这种钙摄取的添加。上述成果表白:粥l具 有间接扩张血管感化,可扩张外周血管、降低心净前后负荷,扩张冠状动脉、添加心肌供 血供氧,从焉阐扬抗心肌缺血的感化。此种感化取钙内流相关。 1.4.2.3流感病毒复制感化 平分别为4.7,O。9mg·L。l。毒性尝试显示对折细胞毒剂量(CC50)为187。2mg·L-l,选择指数 §I)正在定量P(慕测试中大于206。药物感化时间尝试显示飞龙掌血取病毒同时插手细胞 可获得最佳抗病毒结果,病毒传染前、后24小时插手飞龙掌血仍然具有必然抗病毒做 ’ 用。 第一章文献综述 13 1.4.2.4其他感化 此外,飞龙掌盎地上部门的乙醇提取物具有很好的解痉挛【52】和利尿【54】感化。 1.5立题根据及意义 飞龙掌血的化学成分虽有报道,但匿翦仅分手到少量的化合物,因而,我们研究了 飞龙掌血的化学成分,次要目标是为了寻找飞龙掌妞中具有药用疗效的生物活性物质。 尝试次要通过动物化学手段提取分手飞龙掌血中的化合物,获得纯的化合物后通过 质谱似S)、核磁共振谱(NMR)及晶体衍射(X—ra:y)等手段判定其布局。 从尝试材猜中提取分手的化合物能够进一步进行心理活性尝试,从而确定飞龙掌血 中药角活性成分以及无效成分的多寡,为英正在利用过程控制剂量供给按照;并且按照提 取到的化合物的化学布局和性质,能够查抄其它动物能否也含有不异的成分,若是含有 此成分,那就能够斥地新的药源。别的,按照无效成分的布局进行人工合成或者通过改 变无效成分的布局,以加强疗效,降服毒、副感化,摸索创制高效低毒的新药物。 14 飞龙掌血化学成分的研究 第二章尝试材料取方式 2.1尝试材料 2.1。l材料 尝试所用飞龙掌血的地下部门根及根皮(干燥)样品2.8蚝,2005年10月采自云 南省西双版纳自治州。动物标本由西双版纳热带动物园文彬判定,动物标本保留于西双 版纳热带动物园平易近族动物学组。 2。1.2试剂 出产;SephdeX 为日本Daiso公司出产;石油醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇等无机溶剂均为工业纯, 经沉蒸后利用。其它试剂有碘、无水乙醇、浓硫酸等。 2。l。3仪器 英国VG.AutoSpec.3000型质谱仪;Bmker 天平(上海思龙科学仪器无限公司)。 薄层层析显色方式为碘化铋钾试剂;l潞硫酸乙醇溶液处置后烘烤显色。 2.2尝试方式 2。2.1佬学成分的提取、分手 采集的原料2.8蝇背阴处晾干后破坏,用95%的酒精予室温下提取,然后过滤浓缩 蒸于褥到乙醇浸膏255。59。 上述获得的浸膏用5倍量的水并插手10%的硫酸15‰l,分离平均后用石油醚萃取, 分359。 (30:1~O:1),获得化合物5(15mg)、7(6m曲。 释部门用氯仿.甲醇《差:董)消融拌样怎,用200~300爱的柱层誊斤醚胶进行粗分,氯仿: S印hadeXLH一20,获得化合物1(15m)、3(11m曲。 IH.20和RP.18进行细分,得化合 Fr.1、Fr.2、轧3。此中Fr.2经频频硅胶柱、S印hadeX 第二章尝试材料取方式 物6(8m曲、9≤12黻妨。分手流程见图2-董。 Zbdd口,f口船妇f£cd l ex仃amd州m95%E。oH forthreeti!Iles瓢d I eVaporated 幻玉≯瓣ss遮Vae瑚整 cnldeextlac伍 inwatI暑rand 8uspended partitioned 砸m and以一bu诅nol pe昀lemethcr,E幻Ac l f pe岔ol锄 溅·(509) 嚣老妇. 约lex熏.《 silica gelcoh瑚骗 蠢l堍w缝 s羹ieal CHCl3州eOH col嘲 加i舳sof i11cfeas矗培 筘k姆鑫珏d LH-20 S印hadcx l . 懿 l Fk-.‘ S(15mg) 7(6娃国 , 。., &。3 Fr.4 堂 l, silical colun期 snicalgel Sepha{ Sep}K妇x 己薹壬-29 RP.18 I(蚋窖) 讯:n蓟 3(1lm曲 o,1,m口、 2(15氆蛰 4(5mg) 8(7mg) 图2.1飞龙攀盎诧学成分提取分手流程图 nenow aJld ofexn撇Honisolationm乃d妇妇d妣c妇4 Fig.2一l dia辨un 2.2.2单体化合物的纯度检测 选用三穗分歧的溶荆系统,用硅胶板对单体化合物进行薄层层析,然蜃用紫外灯、 碘蒸气、10%硫酸一乙醇、碘化铋钾试剂显色,察看能否为单一黑点。如正在三种溶剂系统 中展开显色均为单一黑点,剽酉认为分手德到的物质为单一物质。 2.2.3单体化合物的布局表征 采用w出MS、删S、1H№积、13C NMR等现代波谱手艺进行布局判定,并连系 查阅的文献,确定化合物的布局。 16 飞龙掌血化学成分的研究 第三章成果取阐发 3。1化合物纯度检测 将分手获得的化合物单体,用薄层层析(TLC)检测,别离采用三种分歧的溶剂系统 展开。正在紫外阐发仪254眦和365nm下察看,然后正在碘缸中显色,再别离喷lo%硫酸一 乙醇、碘化铋钾显色,均为单一黑点,因而可认为所分手化合物力纯化合物。部门单体 化合物纯度检测成果见表3—1。 旋3一l部门化含物酶缝度检测缩果 Table3—1The of for resultspuritysomecompounds 3.2化合物布局解析 3.2.1化合物1的布局解析 8个双键。 化含物薹正在紫终下有7.氧化。8代替喷鼻豆素强的特征接收峰瑟鲢嗣,而且氧化铁试蠢j中 不显色,申明没有酚羟基。氢谱数据取晚期从九里喷鼻^九r憾膨懿Dzf棚【108】平分离的小叶九 里喷鼻内酯的醋酸盐类似。文献的研究仅有少量的母体化会物的核磁数据,因而这个化合 物的所有一维和二维核磁阐发具有指点意义(表3.2)。 参照喷鼻豆索的布局,化合物l可能就是小叶九里喷鼻内酯。 H.3和H.4(66.23,67.62)是典型的番豆素n羰基双键的共振特征。正在NoESY中, 第三章成果取阐发 17 H.6有交叉峰,申明甲氧基连正在C.7位。芳喷鼻环中残剩的质子被异戊二烯基代替。 这些是由氧次甲基(C.1·,65.12)信号构成,且取近程的氧次甲基(C.2’64.89)耦合。剩 余的信号包罗正在鞠浊C谱中环外的亚甲基$4.60,4。66)取C.2’耦合,也取未被屏障的甲 基碳(C.5’)耦合。甲基质子取外亚甲基碳(C.4’)、C.2’以及间接毗连正在C.3’上的烯烃基碳 耦合。 阳皿C阐发明白了中所有的1H和13C信号,确定化合物1是小叶九里喷鼻内酶 (murraXocin,7.甲氧基.8.(1’.乙氧基.2‘.羟基.3’.甲基丁烯基)。喷鼻豆素)。 表3.2化合物l的1HN凇(4∞M糊,bC删1∞Ⅻz)和HMBC数据 HMBC data lm Table3也.1H CDCl3(6 NMR(400Ⅷz),13C删100Ⅻz)aIldspec臼mofc哗llnd 法_pp哟 18 飞龙掌血化学成分的研究 3.2.2化合物2的布局解析 类化含物。由高分辩质谱确定其量为308.1262,式为C1棚2006。 子的双沉峰信号,申明该化合物的3、4位伉b)未发生代替。图谱中还显示出一组锋利 三沉峰,为苯环上的亚甲基(f)。奶.59处还有一组次甲基的四沉峰信号(酌。图谱中还显 示出一组羟基(h,i)的活跃氢信号犯.01,沉水互换后消逝。占1.30(6H)处呈现了一组单峰, 为异羟焉基上的两组警基质子信号a,砷。图谱中还能够察看到一组苯环质子(由的单峰信 号66.65(1H),因为遭到相邻两个甲氧基的屏障感化而使化学位移移向高场。综上所述, (2)【㈣。 H3cO . – _ ∥避鞋d 一柳。lcN∽焉hNoI :-!il.: Me0 0 H3cH6 O —-———————–—◆ OMe (I)M+308 OCH3 疆蚤暾2a90CllHll0国 图3.1化合物2的裂解 F疆3一l戮豁s印ee溉l缸gmen耄a薮强ofe粼删2 化合物3 1。92(s,3H,N—CH3)。1jC-NMR(100MHz,CDCl3):6 0,50。75l(C一5,t),57.72_S(C-7,耄),100.832(C—l5,t),101.166(C—16,9,106.706(C一4,∞, 第三章成果取阐发 19 化合物判定为原阿片碱雕q。 、M e OH 12嚣彘圆6 12c:lT妇212 、Me 12:m忽149 12c蕊垃l55 12:m,zl88 12:m/zl65 12c翦比194 12e:m/zl65 网3.2化合物3的质谱 3 Kg,3-2醚懿s蹲ee红蠢参镤印托圭a囊。魏酲∞鹾}嘲d 3.3化合物理化取波谱数据 化合物2 C16H2006,无色针晶。[Q】D+50。(CHCl3,c=o.16).254删l紫外光灯下呈紫色荧光。 1708,1600,1432,1325,1252,1230.E蹦S m/Z(rel.础,%):308(坩,1),250(20)’ l 249(坩一(CH3)2C(OH)),21),22l(6),29(Nr一(CH3)2C(OH)一CH(OH),61),208(13), 207(甜一(eH3)2C(O竭-Cl{(O国·CH2,lOO),205(12),16l(38)。 1H NMR(400Hz,CDCl3)67 1.30(6H,s,4。一C,3’-Me),2.Ol(2H,s,2×OH), 2。60(1疆,越,j=98.36,10。36沌,l’一珏僻)),2。84(1珏,dd,p13。岛10。36Hz,l’堪群)), 6。65(1鞭,s,6-珏),7。85(1珏,d,J=9,54王差z,凄一丑【)。 20 飞龙掌血化学成分的研究 化合物4 1 m积 入m缸衄(109£):204(4.43),232(4.37),283(4.42),323(3.97),35sh(3.44).R(I(Br)V cmq:3432,2922,2852,1646,1494,1463,1273,1238,1037。 1H—NMR(400 -NCH3)。 13C-1q’凇(100 120.2(C一6),1 lm瓜数据确定为8一羟基二氢 61.9∽Me),56.2(-OMe),40.8(.NCH3),通过1H№皿和·3C 白屈菜红碱【1¨】。 化合物5 1H·NMR(400 MHz,CDCl3):67.80(1H,dd,J=8.5,1.0 Hz,f证an0【H),7.31(1H,dd,J=7.8,7.56Hz,H一6),7.02(1H,dd,J=7.08,2.8Hz,H一7), 7.OO(1H,d,J=2.9Hz,向raIlpH),4.39(3H,s,OCH3),4.Ol(3H,s,OCH3)。 1jC一卜M己(100 化合物6 门CⅫ皿:6 118.1(C-5),114.8(C一4a),11 56.6(7一OCH3)。 1H№很:6 31。 该化合物判定为茵芋碱【11 化合物7 H,5.12.Found:C,60.99;H,5.12.Ⅱ己(KBr)vm戕cm叫:1720。 第三章成果取阐发 21 1HNMR:6 6。33(1H,s,6一琊,7。95(1H,d,扣lO.OHz,4一两。 ¨C栅(100 6l。5(CH30.8)嘲。 化合物8 l;E 飞龙掌血薪双喷鼻豆素,C3摄3霹09,无色针晶。秘’265—270℃◇锺ze戳壤h曲;C,68。3 6 NMR: 6.09.Foulld:C,68.46;H,6.10.R∞r)v喇cm-1:3500,1720.1H1.14,1.35(each 3.79,3.93,4。03(each 5.88(e∞hlH,d,J==9.5Hz,3·,3’一H),6.06,6.07(_eachlH,s,6一,6’-]田,7.56,7。7l(eachlH,d, J=9.5比,4一,4‘一聊.EMS 563Q董颡h髑。 化合物9 8.87(1H,di乒9l娩,H.11);EI.Ms脚/z:362【M]。 ·· 1jC一ⅫⅢi-(100 蔓3王.8(C一董2幻‘1鞭。 飞龙掌血化学成分的研究 2 l 3 ^、 6 4 S OMe M 醚e 0Me O 7 吣 \. 9 8 图3.3飞龙掌妞平分离到的化合物布局 毯g。3-3C锄po强叁i∞l啦莲氐啜勋蠢斑勉嚣积暮c瓣 第四章问题取会商 第四章问题取会商 4.1化合物分手纯化 柱多采用实空柱层析(vLC),取常压柱层析比拟,分手结果和效率获得很大提高。 利用船一董8柱时,有时样品不溶于甲醇,可用少量的毗啶消融样品,上样,然后用 水或者lO%甲醇一水洗脱至无吡啶味,再用所选的洗脱剂洗脱。 4。2化合物布局判定 分手雩譬到的喷鼻豆素,这一类型的喷鼻豆素以伞形花内魏为母体,多正在C一7位连有甲氧基, 此中化合物2的C.5和C.8上的氢被甲氧基代替,正在KoH乙醇溶液中呈阳性反映,故 确定为喷鼻豆素类化合物。这种方式正在喷鼻豆素类化合物,特别是天然喷鼻豆素类化合物的定 性检测上具有十分主要的感化和意义。 24 飞龙掌血化学成分的研究 第五章结论 飞龙掌血做为一种常用的保守中药,具有多种生物活性【耵。本论文从飞龙掌血根及 根皮平分离获得9个化合物,操纵现代波谱手艺对其进行告终构判定,此中包罗4个喷鼻 三警基喷鼻豆素、《鳓飞龙掌曲新双喷鼻豆素)和5个生物碱(3)原阿片碱、(4)8.羟基二氢 喷鼻内蘸、8一(2+,3’.二羟基.3’一甲丁基).5,7。二甲氧基喷鼻豆素、原阿片碱)为初次从该平分 离获得。 飞龙掌血做为一种极具潜力的中药,正在我国西医临床中使用汗青长久,资本丰硕, 并且其化学成分良多,若是对其无效成分进行愈加深切系统的研究,并发觉其新的药理 感化,将会开辟出新型的中药制剂。同时该当留意开辟飞龙掌血的经济价值,使其正在医 疗、保健、经济和社会效益等方面斥地更广漠的用处。 参考文献 25 参考文献 【1】贾敏如,李星炜冲国平易近族药志要【M】.:中国医药科技出书社,2005. 【2】黄海涛,李春日,曹锐,等.近几年日本国度赞帮西医药研究项目阐发【J】.辽宁西医学院学报,2002, 1. 4(3):250一25 【3】寒川庆一,山下秀之,松田秀秋等.高速液体夕口叮}少乡。,r—c上务各类药用人参中廿术二。 一齐阐发[J】.药学,1995,115(3):241-249. 【4】王良信.苏联药用动物资本学的现状和成长[J】.医学院学报,1990,13(1):74.76. 【5]PPuShpangad姐.药用动物的可持续操纵及其平安性【J】.亚太保守医药,2008,4(2):12.15. 【6】蔡周权,代怯,袁浩宁.陈皮挥发油的药效学尝试研究【J】.中国药业,2006,15(13):29.30. 【7】杨宏烨,孙岳胤.兴安杜鹃的药用价值[J].中国林副特产,2000,(1)46. 【8】黄成绩,中国科学院中国动物志编纂委员会冲国动物志[M】.:科技出书社,1997,43(2):1.6. 【9】宋立人,丁绪亮.现代中药大辞典【M】.:人平易近卫生出书社,2000:255.256. 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